Trong các thí nghiệm nuôi cấy tế bào, các pipet được sử dụng rất thường xuyên và độ chính xác của hoạt động của chúng ảnh hưởng trực tiếp đến độ tin cậy và độ lặp lại của kết quả thử nghiệm. Sau đây là một số lời khuyên cho hoạt động của pipet trong nuôi cấy tế bào, mà tôi hy vọng sẽ hữu ích cho thí nghiệm của bạn.
1. Chọn đúng pipet và đầu
- Lựa chọn pipet: Chọn pipet phù hợp theo thể tích chất lỏng sẽ được chuyển. Phạm vi khối lượng hoạt động bình thường của hầu hết các pipet là 10-100% của phạm vi được chỉ định. Cố gắng tránh đặt khối lượng của một pipet thành dưới 10% khối lượng tối đa và sử dụng một pipet phạm vi nhỏ cho các hoạt động ống có khối lượng nhỏ.
- Lựa chọn đầu: Chọn một đầu phù hợp với pipet và đảm bảo rằng đầu được chèn chặt để tránh rò rỉ không khí. Ngoài ra, đối với các thí nghiệm cụ thể (như hoạt động vô trùng), nên chọn các mẹo tự động hóa.
2. Rửa sạch đầu
Rửa sạch đầu 2-3 lần để tạo thành một màng đồng nhất trong đầu, do đó cải thiện độ chính xác của đường ống. Ngoài ra, nó có thể vô hiệu hóa hiệu ứng mao quản trong các micropipettes, có thể làm cho nhiệt độ bên trong đầu phù hợp với nhiệt độ mẫu cho quá trình ống có thể tích khối lượng lớn. Cần lưu ý rằng việc rửa sạch có thể có tác dụng phụ đối với kết quả khi các dung dịch nóng và lạnh.
3. Kiểm soát tốc độ của nguyện vọng và phân phối
- Nhấn mịn: Nhấn và nhả nút điều khiển trơn tru và liên tục, thay vì nhấn và giải phóng nó đột ngột. Điều này có thể tránh sự hình thành của bong bóng và cải thiện độ chính xác của đường ống.
- Tạm dừng: Sau khi hút chất lỏng, hãy để đầu trong chất lỏng trong khoảng 1 giây, đặc biệt là đối với các chất lỏng nhớt. Ngay lập tức rút đầu ra có thể dẫn đến hút chất lỏng không hoàn chỉnh.
4. Chú ý đến độ sâu ngâm của đầu
- micropipette: đầu nên được ngâm 2-3 mm.
- Pipet phạm vi lớn: Độ sâu ngâm phải là 5-6 mm. Nếu đầu được ngâm quá sâu, không khí bên trong đầu sẽ bị nén, khiến quá nhiều chất lỏng bị hút. Chất lỏng còn lại trên bề mặt của đầu cũng có thể ảnh hưởng đến kết quả.
5. Hoạt động dọc
Nhúng pipet trong mẫu càng theo chiều dọc càng tốt, tốt nhất là không lệch khỏi vị trí dọc hơn 20 độ. Ngoài việc cải thiện độ chính xác của thể tích pipet, điều này cũng có thể ngăn chất lỏng chảy vào pipet do nghiêng quá mức.
6. Quan sát đầu pipet
Khi chuẩn bị xả chất lỏng, hãy chú ý đến việc có những giọt dư thừa được gắn vào bề mặt của đầu pipet hay không. Sau khi xả chất lỏng, đầu của đầu pipet có thể được chạm vào bên cạnh của thùng chứa để đảm bảo rằng việc xả đủ kỹ lưỡng để ngăn chặn giọt chất lỏng cuối cùng còn lại trên đầu của đầu pipet.
7. Chọn phương pháp đường ống thích hợp
- Phương pháp hút dương: Thích hợp cho hầu hết các chất lỏng. Khi hút chất lỏng, nhấn nút vào điểm dừng đầu tiên, sau đó từ từ nhả nút để trở về điểm bắt đầu. Sau đó nhấn nút đến điểm dừng đầu tiên để xả chất lỏng, tạm dừng một lúc và tiếp tục nhấn nút vào điểm dừng thứ hai để thổi ra chất lỏng còn lại. Cuối cùng giải phóng nút.
- Phương pháp hút ngược: Thích hợp cho chất lỏng có độ nhớt cao, chất lỏng hoạt động sinh học, dễ dàng tạo bọt chất lỏng hoặc một lượng chất lỏng cực nhỏ. Đầu tiên hút trong nhiều chất lỏng hơn phạm vi tập hợp và không thổi ra chất lỏng còn lại khi chuyển chất lỏng.
8. Giữ cho pipet sạch và duy trì
- Hiệu chuẩn thường xuyên: Sau khi sử dụng pipet trong một khoảng thời gian, nó cần được hiệu chỉnh để đảm bảo độ chính xác của nó.
- Làm sạch: Sau mỗi lần sử dụng, pipet nên được làm sạch kịp thời để tránh chất lỏng còn lại làm ô nhiễm thí nghiệm tiếp theo.
9. Hoạt động vô trùng
Trong nuôi cấy tế bào, hoạt động vô trùng là rất quan trọng. Khi sử dụng pipet, hãy chú ý đến các điểm sau:
- Khử trùng: Trước khi sử dụng, lau pipet và đầu bằng một quả bóng bông để khử trùng.
- Tránh ô nhiễm chéo: Sử dụng một mẹo mới cho mỗi mẫu để tránh ô nhiễm chéo.
Với các mẹo trên, bạn có thể sử dụng pipet cho các thí nghiệm nuôi cấy tế bào chính xác và hiệu quả hơn, và cải thiện độ tin cậy và độ lặp lại của kết quả thử nghiệm. Tôi hy vọng những lời khuyên này sẽ giúp bạn!